食品酶免试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物果糖(fructose)水平。用纯化的植物果糖(fructose)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物果糖(fructose)，再与HRP标记的果糖(fructose)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的植物果糖(fructose)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中植物果糖(fructose)浓度。
食品酶免试剂盒的标本要求：
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
食品酶免试剂盒的操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240ng/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
120ng/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
60ng/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
30ng/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
15ng/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应(此时蓝色立转)。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
更新时间：2022-04-13 
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