小鼠胰岛素自身抗体ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本:血清或血浆
试验原理:
IAA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IAA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IAA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IAA的浓度呈比例关系。
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
小鼠胰岛素自身抗体ELISA 检测试剂盒
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
小鼠胰岛素自身抗体ELISA 检测试剂盒
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
80 mIU/ml (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
40 mIU/ml (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
20 mIU/ml (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
10 mIU/ml (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
5.0 mIU/ml (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
2.5 mIU/ml (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 mIU/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
小鼠胰岛素自身抗体ELISA 检测试剂盒
试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IAA标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IAA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-80mIU/ml
4、敏感度: 0.1 mIU/ml
1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic acid 1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 [116-63-2] 100g
D-Biotin D-生物素 [58-85-5] 500mg
D-Biotin D-生物素 [58-85-5] 1g
2-Amino-8-naphthol-6-sulfonic acid 2-氨基-8-萘酚-6-磺酸 (γ酸) [90-51-7] 100g
Amisulpride 阿米舒必利 [71675-85-9] 25g
Amphotericin B solution, sterile 溶液(2.5mg/ml) / 10ml
m-Aminophenol 3-氨基酚 [591-27-5] 25g
o-Aminophenol 邻氨基酚 [95-55-6] 25g
p-Aminophenol 对氨基酚 [123-30-8] 25g
p-Aminophenol 对氨基酚 [1197-55-3] 100g
Aminophyllin hydrate 氨茶碱 [317-34-0] 500g
2-Aminopyridine 2-氨基吡啶 [504-29-0] 50g
3-Aminopyridine 3-氨基氮杂苯 [462-08-8] 25g
Aminopyrine 氨基比林 [58-15-1] 100g
Aminosulfonic acid 氨基磺酸 [5329-14-6] 500g
2-Aminothiazole 2-氨基噻唑 [96-50-4] 100g
2-Aminothiazole 2-氨基噻唑 [96-50-4] 500g
Aminotriacetic acid 氨三乙酸 [139-13-9] 100g
Amlodipine besylate 苯磺酸氨氯地平 [111470-99-6] 25g
Ammonium acetate 乙酸铵 [631-61-8] 500g
Ammonium acetate 乙酸铵 [631-61-8] 500g
Ammonium acetate 乙酸铵 [631-61-8] 500g
Ammonium benzoate 苯甲酸铵 [1863-63-4] 250g
Ammonium biborate , trihydrate 硼酸铵三水 [12007-58-8] 250g
Ammonium bicarbonate 碳酸氢铵 [1066-33-7] 500g
Ammonium bismuth citrate, hydrate 柠檬酸铋铵 [31886-41-6] 5g
Ammonium bisulfate 硫酸氢铵 [7803-63-6] 500g
Ammonium bromide 溴化铵 [12124-97-9] 250g
Ammonium carbonate and Ammonium carbamate mixture 碳酸铵 [506-87-6] 500g
Ammonium cerium (IV) nitrate 硝酸铈铵 [16774-21-3] 25g
Amygdalin 苦杏仁苷 [29883-15-6] 5g
Bromothymol blue, free acid 溴百里酚蓝 [76-59-5] 25g
Bromothymol blue, free acid 溴百里酚蓝 [76-59-5] 50g