运用ELISA检测试剂盒进行实验时，应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验效果的准确性。ELISA试剂盒有时本底较高，说明有非特异性反应。
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其间包含：

固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，ELISA试剂盒时刻及其蛋白量也有一定影响,一般多选用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它实验条件相一起，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1～10μg／ml。

除此之外还要注意以下事项：
1.承认ELISA检测试剂盒在有效期内；
2.仔细阅读阐明书；
3.按说明书承认全部试剂*（数量、体积）；
4.标本制备要规范，ELISA试剂盒每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存；
5.依据检测标本数量承认所需试剂的量；
6.准备好全部实验额定所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等；
7.按阐明书将所用试剂平衡至室温，制作所需试剂。