我们在用ELISA显色法测定乙肝五项的过程中,会不同程度出现假阳性的结果。经过观察与分析,总结了ELISA法测定乙肝五项中出现假阳性的几种原因,来与科研工作者进行分享和探讨,以便在未来工作中避免出现错误,提高我们的实验效率和水平。
在一次检测试验中,我们发现所做乙肝五项的反应板都呈现蓝色,经过仔细查找原因,结果发现,操作中将待显色的反应板置于6%“84”消毒液刚擦拭过的桌面上,会使其反应结果均显蓝色。为进一步证实,我们便做了以下试验。
1 材料
1.1 “84”消毒液购自上海利康消毒高科技有限公司。
1.2 乙肝五项ELISA试剂盒购自上海信然生物有限公司。
2 方法与结果
2.1 方法
将已知的HBsAg阳性、阴性和弱阳性的血清操作至显色时,分为6组,分别于1min、5min、10min、15min、20min、25min加上显色剂后,置于用6%“84”消毒液擦试过的桌面上(桌面上无明水,但有湿度)放置15min至25min观察结果。当20min过后,我们发现,其结果均呈蓝色。
2.2 结果
将已知的HBsAg阳性标本操作至加显色剂后分别加入不同浓度“84”消毒液5μl。随“84”消毒液浓度减少其显色逐渐呈:黄绿、棕红、淡蓝、蓝色,至0.001%浓度无颜色改变。
3 讨论
我们所用ELISA法中的“B”显色剂,主要成份是四甲基联苯胺(TMB),而酶标记物中的酶为辣根过氧化物酶。“84消毒液的主要成份为要效氯,分解后的游离氯能取代ELISA显色剂B液(TMB)上的氢,使其呈蓝色(卤代反应),而高浓度的“84”消毒液呈酸性,可使TMB呈。
由此可见,当“84”消毒液在空气中的浓度大于0.001%时,即可对ELISA法的显色造成影响,使结果为假阳性。因此我们认为,“84”消毒液可对ELISA法所有以TMB做底物的试验有影响。为找到有效的解决假阳性的办法,我们打开门窗、换气扇,工作人员的手和衣物均不接触“84”消毒液,再把所有的标本重新洗涤5次,加上显色剂,除弱阳性标本外,其余均与未被干扰结果相符。故被“84”消毒液影响的标本均应重做,以免影响结果。