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洗涤步骤看似很简单无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，就会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，小鼠ELISA试剂盒怀疑洗涤不够，可以尝试增加洗涤次数。

小鼠ELISA试剂盒使用方法：

1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠ELISA试剂盒实验操作注意要点：

血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。

混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存按小鼠ELISA试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。

对于科研人员来说小鼠ELISA试剂盒原理和操作步骤并不陌生，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作过程中夹杂着洗涤和封闭步骤。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果操作不合理，也会很大程度上影响实验的准确度。实验结束时我们是否能获得有意义而且准确的信息，这在很大程度上取决于操作结果的正确与否。

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