ELISA试剂盒操作说明:
1、封板膜只做一次性使用。
2、标本中待测物质含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。
3、各步加样均使用加样器,并经常校对其正确性,一次加样时间控制在5分钟内。
4、液体标本置4℃保存应小于1周,-20℃。
ELISA试剂盒洗板时还应注意以下问题:
1、需每天校正注液量及残液量,洗涤后残液量不得大于2μl;
2、及时更换破损吸液针,避免破坏底板包被;
3、针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度,避免冲洗针头卡住酶标板;
4、注意调整洗液量,洗液量过多将溢出,过少将达不到洗涤效果;
5、关机前使用蒸馏水冲洗管道,避免洗液的结晶物堵塞管道;
6、不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。
ELISA试剂盒注意事项:
1.边缘效应 使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应",即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应",并且可提高测定的重复性。
2.加样在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
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