在我们培养 细胞系的过程中，对细胞系进行传代是一项常规的操作，传代可以帮助我们扩大 细胞系培养的数量，同时也避免了因 细胞系进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。今天我们简单讲讲传代操作（主要针对贴壁细胞系）。

实验原理：

当培养的 细胞系增殖达到一定密度后，将会出现密度抑制现象，表现为 细胞系的生长和分裂速度逐渐减慢，甚至停止。贴壁 细胞系会在培养瓶中长成致密单层 (悬浮 细胞系会充满整个体积的培养液)，铺满培养瓶底部，此时如果不及时进行分装再培养，即传代培养， 细胞系将逐渐走向衰老、死亡，将培养的 细胞系从一个容器以适当比率转移到其他容器中扩大培养，称为传代培养。

首先，我们需要准备好相应的实验器材：装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、离心管、废液缸。至于其他的超净台、培养箱、离心机等都是一个 细胞系间的基础设施。

然后，我们需要把我们准备的器材放入超净台，打开紫外照射灭菌，值得注意的是若是培养的 细胞系对温度比较敏感，可以将含血清的培养基瓶子（包括盛放的瓶子）放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃，再转移到超净台紫外灭菌，当然一般的 细胞系对培养基的温度不是很敏感，不用对培养基加温也是可以的。另外， 细胞系培养间也需要紫外照射半小时左右。

操作步骤：

1、紫外照射灭菌后，我们应该穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩。

2、从培养箱取出 细胞系培养瓶（一般选择处于对数期的 细胞系），用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消毒，转移培养瓶到超净台。

3、打开盖子，轻轻吸出旧的培养液，用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次（注意从侧壁加入，以免冲掉 细胞系），弃去PBS缓冲液。

4、可用移液器加入1-2ml（具体量根据实验需要确定，此处仅为参考用量），“十字"晃动，使充分接触 细胞系。

5、将加入的 细胞系培养瓶转移到倒置显微镜载物台，镜下观察 细胞系消化情况，当 细胞系变圆且大量脱落时，准备终止消化，用75%的酒精喷洒培养瓶表面，转移到超净台。

6、用移液器（或巴氏吸管）加入等量含血清培养基，终止消化。移液器（或巴氏吸管）充分吹打（动作也不要太猛，毕竟 细胞系也是蛮脆弱的），使 细胞系能够脱落。

7、将培养瓶中混合液体转移至离心管中（离心管规格根据实验需要确定），配平，离心5分钟左右（离心机转速根据 细胞系种类而定，常见的有1000rpm/min）

8、离心好后，用酒精喷壶喷洒离心管表面，转移进超净台，打开盖子，将上清液倒入废液缸。

9、加入适量体积含血清培养基，用移液器或巴氏吸管轻轻吹打，制成 细胞系悬液。

10、将 细胞系悬液分装进2个（或多个）洁净灭菌培养瓶，加入适量培养基，盖好盖子

1、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台，观察 细胞系情况， 细胞系应保证一定数量，数量太少会影响生长情况。

12、在培养瓶上做标记，注明传代时间， 细胞系种类，操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面，然后应记得整理操作台，用75%酒精擦拭超净台台面，清理废液和垃圾。

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注意 : 全程严格无菌操作！