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分享有关质粒纯度不高解决办法
更新时间:2023-05-12      阅读:1539

质粒纯度不高解决办法

1.混有蛋白:不要使用过多菌体。经溶液P1、P2、P3处理,离心后溶液应为澄清的,如果还混有微小蛋白悬浮物可再次离心去除后再进行下一步骤。


2. 混有RNA:RNaseA处理不干净,请减少菌体用量或加入溶液P3之后室温放置一段时间。如果溶液P1已保存6个月以上,请在溶液P1中添加RNaseA。


3. 混有基因组DNA:加入溶液P2和P3后应温和混匀,如果剧烈振荡,可能把基因组DNA剪切成碎片从而混杂在质粒中。如果加入溶液P2后过于粘稠,无法温和混匀,请减少菌体用量。细菌培养时间过长会导致细胞和DNA的降解,培养时间不要超过16小时。


4. P3溶液加入时间过长:P3溶液加入后,放置时间不要太长,否则有可能会产生小片段DNA污染。


5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在质粒提取过程中降解质粒DNA,影响提取质粒DNA的完整性,/好选用不含核酸酶的大肠杆菌宿主菌。


6. 质粒的二聚体和多聚体形式:质粒复制过程中形成的,与宿主菌相关,电泳可检测出多条条带,单酶切处理后可变成单一条带。


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