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动物细胞株瞬时转染和稳定转染的区别
时间:2022-09-05      阅读:330
  通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。
  
  动物细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
  
  原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。但是有少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40~50代,这种传代细胞叫做细胞株。
  
  瞬时转染和稳定转染的区别:
  
  瞬时转染:外源片段的表达时间短暂。这主要是因为外源导入的裸露的载体整合入基因组的几率非常低,所以以染色体外形式存在,不能随细胞分裂而一同复制导致拷贝数被稀释导致的。
  
  而且考虑到细胞分裂会稀释质粒的量,所以起初转染的质粒拷贝数高。这就导致瞬时转染呈现一个高拷贝到低拷贝迅速降低的过程,且无法在这个系统上实现可诱导表达。
  
  稳定转染:是相对瞬时转染而言,进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。在这个系统中,质粒表达稳定,拷贝数低,且能实现诱导表达。稳定转染并不是一种与瞬时转染不同的方法,只是对瞬时转染的细胞进行筛选,得到稳定整合的动物细胞株。
  
  稳定整合的几率因基因传递的方法而异,跨度可以从10^-8到10^-1。因此,对于有的转染方法,比如化学试剂介导的转染,其整合几乎可以忽略不计。质粒载体整合的位点并不是*随机分布,依据不同的基因传递方法,呈现不同的靶向倾向性,所以是一种半随机整合。
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