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蛋白试剂盒如何进行比色法,不懂的请看这儿!
时间:2022-08-12      阅读:333
  蛋白定量是生物学实验*的一部分。我们在进行蛋白质的许多实验分析之前都是需要对蛋白质的浓度进行测定,以便确定下游实验是否能顺利进行。
  
  蛋白试剂盒是常用的蛋白浓度检测方法之一。该方法原理是蛋白质在碱性条件中将铜离子(Cu2+)还原为亚铜离子(Cu+),生成的Cu+与BCA形成紫色络合物,并在562nm处具有很强的吸收峰,吸光值与样品中蛋白质的含量成正比,根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
  
  通常蛋白定量常使用的方法是比色法,通常用于总蛋白的定量分析。根据蛋白和比色试剂的结合,可以将比色法分为:蛋白-染料结合法和蛋白-铜螯合化学试剂法。
  
  典型的蛋白试剂盒比色法是考马斯亮蓝G250染料结合法,后者则包括双缩脲法,Lowry法,二喹啉甲酸(BCA)法。
  
  1、Bradford法
  
  考马斯亮蓝G250染料结合法由MarionBardford博士在1976年提出,因此也叫Bradford法,原理是蛋白在酸性条件下和考马斯染料结合,染料的吸收值发生改变,从465nm转移为610nm,并且在595nm处有的吸收差异。
  
  结合到蛋白质分子上的染料数与蛋白所带正电荷成正比,因此可以用该方法来对蛋白进行定量。染料的颜色变化和蛋白中的碱性氨基酸有关,另外范德华力和疏水作用也会影响蛋白与染料的结合。
  
  2、BCA法
  
  1985年PaulK.Smith等人开发出BCA方法,该方法分为两步:首先,在碱性条件下,蛋白将二价铜离子还原为一价铜离子,然后,BCA和一价铜离子结合,形成紫色化合物,该化合物在562nm时有吸收,且吸收值与蛋白浓度呈线性相关。
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